Mission :
Ce projet a pour mission de caractériser une nouvelle voie d'entrée des mycobactéries pathogènes, dépendante de la tétraspanine CD63, et d'évaluer son rôle dans l'invasion cellulaire et la survie intracellulaire des bactéries, notamment dans les phagocytes humains.
Les objectifs spécifiques incluent :
• L'identification et la caractérisation d'un nouveau récepteur pour les mycobactéries pathogènes ;
• L'identification des ligands bactériens interagissant avec CD63 ;
• La caractérisation fonctionnelle des mutants CD63 dans les phagocytes ;
• L'étude des mutants des ligands bactériens chez Mycobacterium abscessus.
En s'attaquant à une étape clé du processus infectieux, ce projet innovant vise à ouvrir de nouvelles perspectives thérapeutiques pour lutter contre les infections à mycobactéries non tuberculeuses (MNT), en particulier celles causées par M. abscessus, une espèce hautement résistante aux traitements actuels.
Activités :
1. Étude du rôle de CD63 dans l'entrée de Mycobacterium abscessus
• Modulation de l'expression de CD63 dans des cellules humaines (macrophages, monocytes) par déplétion (CRISPR/Cas9) ou surexpression.
• Suivi de l'internalisation bactérienne par microscopie et évaluation de la viabilité intracellulaire.
2. Identification des ligands bactériens interagissant avec CD63
• Réalisation de co-immunoprécipitations suivies de spectrométrie de masse pour identifier les ligands bactériens potentiels.
• Validation des interactions CD63-ligands bactériens à l'aide de tests biochimiques (pull-down, ELISA).
3. Génération et caractérisation fonctionnelle de mutants de M. abscessus
• Construction de souches mutantes de M. abscessus délétées pour les gènes codant les ligands candidats de CD63.
• Analyse comparative de l'entrée, de la survie et de la réplication intracellulaire des mutants par rapport à la souche sauvage.
4. Quantification intracellulaire par imagerie haute résolution
• Évaluation de la charge bactérienne intracellulaire par microscopie confocale et par énumération (CFU).
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