Chercheur en biologie végétale h/f

Vos missions en quelques mots Missions : L’agent sera chargé d’élucider le rôle fonctionnel et les mécanismes d’action des protéines LMTP1 et TLP26 dans la biogenèse, la maintenance et la régulation du photosystème II (PSII) chez Chlamydomonas reinhardtii. Ses missions principales consisteront à : - Identifier les partenaires d’interaction de LMTP1 et TLP26 au sein du PSII et d’autres complexes photosynthétiques. - Comprendre le mécanisme moléculaire par lequel ces protéines influencent la performance photosynthétique. - Établir un lien entre le phénotype « stay green » observé et les processus redox ou de signalisation rétrograde. - Développer et caractériser des mutants génétiques pour valider les hypothèses in vivo. Activités : A. Identification des partenaires d’interaction - Isoler des membranes thylakoïdiennes à partir de cultures de C. reinhardtii (conditions normales et stress lumineux). - Réaliser des traitements salins pour exposer le complexe Mn du PSII. - Appliquer des agents de réticulation (cross-linkers) en présence de protéines recombinantes CrLMTP1 et CrTLP26. - Collaborer avec des partenaires externes pour identifier, par spectrométrie de masse, les points de contact entre les protéines d’intérêt et les sous-unités photosynthétiques. - Utiliser des techniques de marquage de proximité (ex : TurboID) pour cartographier l’interactome des protéines cibles. B. Caractérisation fonctionnelle et mécanistique - Concevoir et produire des variantes mutées des domaines TPM de LMTP1 et TLP26 (mutagenèse dirigée sur des sites clés : cystéines conservées, site de liaison au métal, etc.). - Réaliser des essais de pull-down in vitro/in vivo pour valider les interactions identifiées. - Mesurer l’évolution d’oxygène, la fluorescence de la chlorophylle a et le transfert d’électrons QA-QB sous différentes conditions. - Utiliser des colorants sensibles aux métaux (ex : BODIPY) pour suivre la compartimentation du Mn dans le lumen thylakoïdien, C. Génération et phénotypage de mutants - Générer des mutants ponctuels de C. reinhardtii par CRISPR/Cas9 sur les sites identifiés comme critiques. - Concevoir des constructions pour le marquage in vivo (tags fluorescents, TurboID) afin de suivre la localisation et l’interactome des protéines cibles. - Confirmer l’édition génétique par PCR et quantifier l’expression protéique par western blot. - Phénotyper les mutants sous différentes conditions environnementales (lumière, température, milieux de culture) et mesurer l’activité photosynthétique (fluorescence, fixation de CO₂, évolution d’O₂). - Analyser la stabilité des complexes photosynthétiques et la distribution des protéines cibles par électrophorèse 2D. Contexte de travail : Intégré·e au sein de l’équipe Photosynthèse & Environnement (P&E) du BIAM (Biosciences et Biotechnologies d’Aix-Marseille), un laboratoire du CEA situé sur le campus de Cadarache, vous rejoindrez une équipe pluridisciplinaire dédiée à l’étude des mécanis Voir plus sur le site emploi.cnrs.fr Profil recherché Competences : Compétences techniques (savoir-faire) - Maîtrise avancée des techniques de biologie moléculaire : clonage, mutagenèse dirigée, PCR, western blot. - Expérience confirmée en biochimie des protéines : production de protéines recombinantes, purification, essais de pull-down, réticulation chimique. - Connaissance approfondie des méthodes de spectroscopie et de mesure de l’activité photosynthétique : fluorescence de la chlorophylle, évolution d’O₂, titrations redox. - Maîtrise des outils de génétique inverse (CRISPR/Cas9) et de transformation de Chlamydomonas reinhardtii. - Expérience en microscopie confocale et en analyse d’images pour le suivi de protéines marquées. - Capacité à utiliser des logiciels d’analyse de données omiques (spectrométrie de masse, interactome). Connaissances théoriques - Excellente compréhension de la photosynthèse, de la structure et de la fonction du PSII, et des mécanismes de biogenèse et de réparation des complexes photosynthétiques. - Connaissance des voies de signalisation rétrograde et des processus redox dans les chloroplastes. - Familiarité avec la physiologie des microalgues et les réponses aux stress environnementaux. Savoir-être - Autonomie et rigueur dans la planification et la réalisation d’expériences complexes. - Capacité à travailler en équipe et à collaborer avec des partenaires académiques et techniques. - Esprit d’analyse et de synthèse pour interpréter des résultats multiformes et proposer des hypothèses mécanistiques. - Bonne communication écrite et orale (rédaction de rapports, présentations scientifiques, échanges avec les collaborateurs). Contraintes et risques : Niveau d'études minimum requis Niveau Niveau 8 Doctorat/diplômes équivalents Spécialisation Formations générales Langues Français Seuil